Применение ветеринарного лапароскопа при сборе ооцитов крупного рогатого скота в условиях экстракорпорального оплодотворения
Применение ветеринарного лапароскопа при заборе ооцитов крупного рогатого скота при экстракорпоральном оплодотворении.
Скорость восстановления яйцеклеток, собранных лапароскопическим методом, проще, чем у яйцеклеток, собранных непосредственно из яичника. Кроме того, ветеринарная лапароскопия может использоваться для проверки развития фолликулов.
Установка лапароскопа: вставьте тупой троакар в канюлю, введите канюлю во влагалище, поместите передний конец канюли в заранее определенное положение свода влагалища через ректальный захват, затем извлеките тупой троакар, вставьте троакар пирамиды и отрегулируйте угол. Поверните троакар и длинную ось коровы немного вправо под углом 10 ° и с силой проникните в свод влагалища вверх. Если сопротивление внезапно уменьшается, это означает, что свод влагалища был проколот. В это время выньте троакар. Когда вы слышите звук поступающего воздуха и рука, держащая прямую кишку, одновременно ощущает расширение брюшной полости, это указывает на правильное положение пирсинга. В гильзу вставляется футляр из нержавеющей стали с корпусом эндоскопа. По ощущениям в прямой кишке, если полость мала, ее нужно заполнить небольшим количеством СО2. Скорость впуска воздуха обычно должна составлять 7 ~ л / мин. Количество заправленного газа зависит от размера коровы."Как правило, это около 9 л.
Сбор ооцитов: оператор ректального захвата должен постоянно корректировать положение лапароскопа и яичника и отображать форму фолликулов и желтого тела в различных положениях на яичнике, чтобы определить фолликулы, которые необходимо проколоть. Помощник перехватывает пароль оператора и фолликул, отображаемый на экране в соответствии с прямой кишкой, управляет иглой для пункции, собирает фолликулярную жидкость и помещает фолликулярную жидкость в пробирку для сбора, в которую было добавлено небольшое количество культуральной жидкости. Другой помощник отвечает за работу ножного вакуумного насоса. Чтобы предотвратить потерю яйцеклеток, перед пункцией необходимо запустить вакуумный насос (отрицательное давление должно составлять 100 мм рт. Ст.). После сбора фолликулярную жидкость помещают в штатив для пробирок на 5-10 минут. и фолликулярная жидкость на дне пробирки для сбора засасывается в пластину с помощью соломинки, а затем исследуется под оптическим микроскопом. И обнаруженные ооциты засасываются в тонкую трубку. Два конца тонкой трубки запечатаны, и ооциты можно транспортировать в лабораторию для получения зрелой культуры. После завершения операции тубус эндоскопа вынимается, и два помощника нажимают на обе стороны брюшной стенки коровы, чтобы выпустить газ в брюшную полость. Когда газ больше не выходит, канюлю вынимают и проверяют влагалище через день, чтобы предотвратить инфекцию. Два конца тонкой трубки герметично закрывают, и ооциты можно транспортировать в лабораторию для получения зрелой культуры. После завершения операции тубус эндоскопа вынимается, и два помощника нажимают на обе стороны брюшной стенки коровы, чтобы выпустить газ в брюшную полость. Когда газ больше не выходит, канюлю вынимают и проверяют влагалище через день, чтобы предотвратить инфекцию. Два конца тонкой трубки герметично закрывают, и ооциты можно транспортировать в лабораторию для получения зрелой культуры. После завершения операции тубус эндоскопа вынимается, и два помощника нажимают на обе стороны брюшной стенки коровы, чтобы выпустить газ в брюшную полость. Когда газ больше не выходит, канюлю вынимают и проверяют влагалище через день, чтобы предотвратить инфекцию.
Меры предосторожности:
1. Анестезия: не слишком поверхностная и не слишком глубокая. Эффективная анестезия является обязательным условием завершения пункции фолликулов с целью получения ооцитов. Если анестезия будет слишком поверхностной, корова почувствует боль, и это повлияет на точность операции, и анестезию следует дополнить. Если анестезия будет слишком глубокой, корова не будет устойчиво стоять или даже лечь, что также повлияет на операцию. Если корова лежит, операцию следует немедленно прекратить, а канюлю и лапароскопическую трубку следует быстро извлечь. В то же время следует уделять внимание тому, чтобы вовремя выпустить баодин, чтобы не травмировать корову.
2. Прокол: ректальный зажим должен правильно захватывать угол прокола при прокалывании свода влагалища, чтобы предотвратить прокол прямой и толстой кишок. При прокалывании фолликула не следует протыкать иглу слишком глубоко, иначе это повредит вещество яичника и вызовет кровотечение. Это не только приведет к загрязнению фолликулярной жидкости, повлияет на обнаружение ооцитов, заблокирует иглы и протоки, но также повлияет на развитие фолликулов на яичнике. восстанавливаться. В случае кровотечения пункцию фолликула следует немедленно остановить, иглу, катетер и трубку для забора крови следует заменить, а иглу и катетер следует промыть 0,01 мг гепарина / мл физиологического раствора перед следующей пункцией фолликула.
3. Сбор фолликулярной жидкости. Собранную фолликулярную жидкость следует максимально поддерживать при постоянной температуре. Лучше всего обнаруживать ооциты сразу после сбора и помещать их в зрелую культуральную среду, содержащую ФСГ, упаковывать их в тонкие пробирки и транспортировать в лабораторию, как правило, с. Время от сбора до инкубатора для созревания культуры не должно превышать 4 часа.
4. Навыки. Успешное использование этого метода требует не только хорошего оборудования, но также требует от оператора высокого уровня знаний и навыков практической работы, а также тесного сотрудничества с двумя помощниками. Поэтому перед экспериментальной эксплуатацией необходимо провести необходимое обучение.
Кроме того, этот метод также можно использовать для заблаговременного получения ооцитов от молодых коров, тем самым увеличивая период использования и репродуктивный потенциал коров, а также ускоряя генетический прогресс. Этот метод будет хорошим способом получить источники яйцеклеток после суперовуляции и использования изолированных яичников.
